電泳儀的分類(lèi)使用方法和注意事項(xiàng)
電泳儀的分類(lèi)使用方法和注意事項(xiàng)
電泳是實(shí)現(xiàn)電泳分析的儀器。一般由電源、電泳槽、檢測(cè)單元等組成。所謂電泳是指帶電粒子在電場(chǎng)中的運(yùn)動(dòng)。不同的物質(zhì)因其不同的電荷和分子量而在電場(chǎng)中以不同的速度運(yùn)動(dòng)。在此基礎(chǔ)上,可以對(duì)不同的物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析,也可以將某種混合物組合起來(lái)。子分析或單個(gè)組分提取制備。
常用電泳設(shè)備的基本結(jié)構(gòu)包括:電源、電泳槽和附加裝置。結(jié)構(gòu)配置分為立式和臥式電泳儀。
電泳儀工作原理:
它能吸附溶液中帶電粒子或帶有可解離基團(tuán)的粒子,如蛋白質(zhì)、氨基酸等,在一定的pH條件下,在直流電場(chǎng)中,不可避免地會(huì)被具有相反電特性的電極吸引而移動(dòng)。不同物質(zhì)的粒子在電場(chǎng)中的運(yùn)動(dòng)速度不僅與其帶電狀態(tài)和電場(chǎng)強(qiáng)度有關(guān),還與介質(zhì)的大小、形狀和粘度有關(guān)。根據(jù)這一特點(diǎn),電泳的應(yīng)用可用于不同物質(zhì)的定性或定量分析,或某種混合物的成分分析或單成分提取制備。電泳儀就是根據(jù)上述原理設(shè)計(jì)制造的。
影響電泳的因素很多,主要包括被分離物質(zhì)的電荷量、電場(chǎng)強(qiáng)度、緩沖液的pH值和離子強(qiáng)度、支持介質(zhì)的化學(xué)惰性等。
電泳儀分類(lèi):
根據(jù)電泳中是否使用支持介質(zhì),分為自由電泳和區(qū)帶電泳。
游離電泳不使用支持介質(zhì),電泳在溶液中進(jìn)行。這種類(lèi)型的電泳分為非自由界面電泳和自由界面電泳兩種。非自由界面電泳是指懸浮在溶液中的所有帶電粒子(如各種細(xì)胞)通電后都運(yùn)動(dòng),不出現(xiàn)界面,如微電泳。在自由界面電泳中,分離的物質(zhì)集中在某一層,形成各自的界面,用于定性或定量分析。自由界面電泳需要昂貴且精密的電流儀器,僅用于等電聚焦、等速電泳等少數(shù)特殊電泳。
區(qū)帶電泳使用支持介質(zhì)。根據(jù)支持介質(zhì)不同,分為濾紙電泳、醋酸纖維素膜電泳、薄層電泳和凝膠電泳。此外,根據(jù)支持介質(zhì)的不同裝置形式,可分為水平板電泳、垂直板電泳、垂直盤(pán)電泳、毛細(xì)管電泳、橋式電泳和連續(xù)流電泳。
幾種常用的電泳儀器有:
1、全自動(dòng)熒光/可見(jiàn)光雙系統(tǒng)電泳儀
具有熒光/可見(jiàn)光雙系統(tǒng),使用熒光試劑項(xiàng)目如CK,LD同工酶。優(yōu)點(diǎn):靈敏度高,精度高,高壓低溫系統(tǒng),速度非常快。
2、全自動(dòng)醋酸纖維素膜電泳儀
是可見(jiàn)光單系統(tǒng),采用醋酸纖維素膜電泳片,優(yōu)點(diǎn)是自動(dòng)化程度較高。多用于臨床常規(guī)血清蛋白電泳分析。
3、全自動(dòng)瓊脂糖電泳儀
為單一可見(jiàn)光系統(tǒng),采用瓊脂糖凝膠電泳膜,具有靈敏度高的優(yōu)點(diǎn),可用于低濃度蛋白質(zhì)檢測(cè),如尿蛋白和腦脊液蛋白,同工酶的分離效果也相當(dāng)好,具有更多的項(xiàng)目和更高的靈敏度。
4、全自動(dòng)電泳分析系統(tǒng)
本電泳儀結(jié)合了上述儀器的優(yōu)點(diǎn),自動(dòng)點(diǎn)樣、電泳、著色(或染色、脫色)、干燥??墒褂枚喾N電泳片,包括瓊脂片、醋酸片、聚丙烯酰胺等,是一種理想的采用可見(jiàn)光和熒光顯色雙系統(tǒng)的電泳儀。
電泳儀的使用方法:
1、先用導(dǎo)線將電泳槽的兩個(gè)電極與電泳儀的直流輸出端連接起來(lái),注意不要接反。
2、將電泳儀電源開(kāi)關(guān)調(diào)至關(guān)閉位置,電壓旋鈕調(diào)小,根據(jù)工作需要選擇電壓和電流量程。
3. 打開(kāi)電源,緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)電壓調(diào)節(jié)旋鈕,直到達(dá)到所需電壓,設(shè)置電泳終止時(shí)間,然后開(kāi)始電泳。
4、工作完成后,轉(zhuǎn)動(dòng)旋鈕開(kāi)關(guān)至零位或關(guān)閉狀態(tài),拔出電泳插頭。
電泳儀使用注意事項(xiàng):
1、電泳儀通電進(jìn)入工作狀態(tài)后,嚴(yán)禁人體接觸電極、電泳等可能帶電的部位,也不得在電泳槽內(nèi)取放東西。請(qǐng)先關(guān)閉電源,以免觸電。同時(shí)儀表必須有良好的接地端子,防止漏電。
2、儀器通電后,請(qǐng)勿臨時(shí)加拔輸出引線插頭,以防短路。雖然儀器內(nèi)部有保險(xiǎn)絲,但短路仍可能對(duì)儀器造成損壞。
3.由于不同介質(zhì)支架的電阻值不同,電泳時(shí)通過(guò)的電流量也不同,游動(dòng)的速度和游到最后所需的時(shí)間也不同,所以不同介質(zhì)支架的電泳不應(yīng)在同一臺(tái)電泳儀上同時(shí)進(jìn)行。
4、當(dāng)總電流不超過(guò)儀器額定電流(大電流量程)時(shí),可以多槽聯(lián)合使用,但注意不要過(guò)載,否則容易影響儀器壽命。
5.在某些特殊情況下,當(dāng)需要檢查儀器的電泳輸入時(shí),允許處于穩(wěn)定狀態(tài)空載啟動(dòng),但必須先接好負(fù)載再以穩(wěn)態(tài)啟動(dòng),否則電壓表指針跳動(dòng)很大,容易造成不必要的人為損壞。
6、在使用過(guò)程中如發(fā)現(xiàn)異?,F(xiàn)象,如巨響、放電、異味等,必須立即切斷電源進(jìn)行維修,以免發(fā)生事故。